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Proteomics 3D solution 蛋白质组学3D解决方案
发表日期:2012-06-29
 

发现2D看不到的低丰度蛋白! 

开创蛋白质组学研究的新时代

随着蛋白质组学研究开展的越来越广泛及深入,传统的研究手段遇到了很大的挑战。一些比较容易发现和研究的高丰度蛋白质被大量报道,而低丰度蛋白质则很难被分离和富集,造成研究的困难。

现在,一种全新的研究技术可以通过在液相状态下按等电点分离粗样品,富集低丰度蛋白质,再结合微pH胶条实现3D研究。

研究低丰度蛋白的最有力工具

1D

低丰度蛋白富集仪

MicroRotofor 微型电泳槽是一种制备型等电聚焦(IEF)仪,它可以将溶液中的复杂蛋白样品按等电点不同分开。无论是单独使用还是做为完整蛋白纯化流程的一部分,MicroRotofor微型电泳槽都可以简单、快速、有效地将蛋白从复杂的蛋白混和物中分离和富集出来。使用MicroRotofor 微型电泳槽,等电聚焦(IEF)是在可自由流动的溶液中进行的。因此,每一个组分都可以非常容易地收集得到,甚至可将某些组分再进行分离。液相IEF对于分离那些在凝胶IEF介质中易于沉淀或分离不好的蛋白更有效。而且,在溶液中进行IEF能够让蛋白保持其天然等电点(pI)。最后,因为IEF的pH梯度是通过载体两性电解质产生的,所以用户可以随心所欲地造成任意连续的pH梯度,从而真正通过pI值筛选蛋白样品。

特点

优势

设计

小量蛋白溶液体积

  • 容许研究者分析非常有限的蛋白样品
  • 可以自主优化分离流程
  • 与其他蛋白分离溶液兼容 (例如 Aurum 血清蛋白小型试剂盒, ReadyPrep 双向电泳净化试剂盒)
  • 使用Rotofor 和小型 Rotofor电泳槽分离的组分可以用来再次分离

易于安装

  • 用户友好
  • 节省时间

10个组分(200–250 ul/组分)

  • 完全、彻底地从样品中筛选蛋白
  • 富集特定蛋白浓度可达10倍
  • 如果只需较少组分,可将组分合并

内置Peltier半导体冷却: (2 档:-20°C或-10°C)

  • 聚焦时保持恒温将提高重复性
  • 防止蛋白质水解和胺甲酰化
  • 可实现蛋白质天然状态下分离 (保持蛋白的天然构向和功能)

紧凑的外形

  • 可放置于任何实验桌上

技术

液体分离介质

  • 可分离在其它介质中难溶的蛋白 (例如疏水蛋白、膜蛋白、大分子量蛋白等)
  • 易于配合其它的分离方案
  • 可实现蛋白质天然状态下分离

膜核心

  • 在收集蛋白时可防止组分间液体相互流动,从而使组分更稳定

连续pH梯度/建立特定pH值

  • 可通过等电点筛选蛋白
  • 可分辨异构体
  • 灵活性 — 可根据不同pH梯度
  • 可与窄范围和微小范围的IPG胶条的结果相匹配

真空收集

  • 快速简便
  • 防止了组分间的交叉污染

一次性使用的分离腔

  • 使用方便
  • 防止了组分间的交叉污染

可旋转腔体

  • 可使溶液充分混匀
  • 减轻蛋白沉淀和对流对电泳的影响

 

 o         在蛋白组学研究中,经典的双向凝胶电泳法(2-DE)对碱性蛋白及低丰度蛋白的分离存在技术障碍,但预分离技术的应用可弥补其缺陷。液相等电聚焦可有效地分离富集复杂蛋白样品。碱性胶条用于2-DE可极大地提高蛋白上样量和凝胶分辨率。将上述两种技术相结合用于碱性蛋白质和低丰度蛋白质的分离鉴定,可使碱端区域双向凝胶图谱质量显著提高,蛋白点更清晰且点数增多,质谱鉴定确信度提高,碱性蛋白和低丰度蛋白质谱鉴定成功率提高,对于蛋白组学研究具有一定的意义。

—— 杨芃原,中国人类蛋白质组组织(CHINA-HUPO)副理事长

 

相关链接:

 

液相等电聚焦大显神威:

http://www.biosou.com/index_newshow.php?newsid=13257

 

用液相等电聚焦电泳纯化藻蓝蛋白亚基:

http://www.cnki.com.cn/Article/CJFD2006-GDXH200606015.htm

 

液相等电聚焦结合双向凝胶电泳分离碱性蛋白:

http://www.ilib.cn/A-gdxxhxxb200610009.html

 

人胃癌组织中分子伴侣蛋白的表达及检测:

http://www.wjgnet.com/1009-3079/13/1809.asp


2D

固相干胶条等电聚焦系统

 

PROTEAN® IEF等电聚焦仪

PROTEAN等电聚焦电泳仪可同时满足高通量实验室或普通用户的需要。它是IEF实验用的专用设备,具有以下特点:

o 高通量电泳平台,可容纳多达24根7cm胶条或12根11cm、17cm、18cm 和 24 cm 胶条

o 半导体冷却平台 ( Peltier-effect ) 精确温控,保证可重复的聚焦结果和更大范围的工作温度 ( 10-25℃ )

o 内置10,000V高压, 2.4mA电流的电源,当达到最高电压时,可更快地达到等电 聚焦所要求的理想伏特小时

o 一次性水化/平衡盘简化了水化胶条转移到聚焦盘的过程,保证残余的样品缓冲液不会通过胶条干扰电流而影响结果

o 有多种聚焦盘和水化/平衡盘可供方便选择;每个盘均能装载1-12根胶条。作为自动化的操作方法可直接在聚焦盘进行水化和等电聚焦过程。为提高实验效率,也可在水化/平衡盘水化胶条的同时,在聚焦盘里聚焦另一组胶条

o 提供预设程序和实时编辑多种方式,最大程度地满足用户的不同需要。基于文本的用户界面,可极简便的编辑程序并允许用户对运行程序进行不断更新

o 可选配热敏打印机,永久记录程序和所运行的数据,运行的数据可通过RS-232 串口传送至电脑中


3D

垂直电泳分离系统

 

微型PROTEAN  Cell系统——世界上最受普遍欢迎的、最方便使用的电泳槽

1.  嵌条天然固定在玻璃板上,省却了分离式嵌条时代的麻烦,且避免了不同厚度的担忧;

2.  平行式和推抐式的组装易如反掌。

3.  兼容预制胶和手灌胶。

4.  玻板、样品梳上均有厚度、孔数的标记,易于识别。

5.  专利的加样导向帮助,不必猜测加样孔的位置。

6.  塑料样品梳不会影响聚合过程,并有防气泡设计。

7.  用转移组件做Western Blotting时,只需1个小时,且所耗缓冲液极少,有内置的冷却器。

PROTEAN II Xi和新型XL垂直板电泳槽

1.  适用于一系列电泳,如SDS-PAGE,双向电泳的一向和二向,Native电泳,制备电泳,梯度电泳及高分辨率核酸琼脂糖电泳。

2.  可同时运行四块胶,多种胶长度选择。

3.  内置冷却芯,可接冷却水,冷却循环池或装入冷却剂,即可消除微笑现象。

 

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